Nasceu em 27 de outubro de 1935, numa família de poetas e contadores de causos, em Santa Isabel, no interior de São Paulo. Ainda criança, descobriu sua paixão pelo desenho e começou a criar os primeiros personagens. Com 19 anos, tentou trabalhar como ilustrador na Folha da Manhã (hoje Folha de S.Paulo). Conseguiu uma vaga de repórter policial.
No ano de 1959, publicou sua primeira tira, com o garoto Franjinha e o seu cãozinho Bidu. E logo espalhou seu trabalho por jornais de todo o país.
Em 1970, quando já contava com um estúdio com diversos profissionais, lançou a revista Mônica, que abriu caminho para títulos de outros personagens. O sucesso extrapolou os quadrinhos e chegou ao cinema, ao teatro, à televisão, à internet, aos parques temáticos e até a exposições de arte.
Mauricio de Sousa ocupa a cadeira número 24 da Academia Paulista de Letras.